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的影响MIG1tup1.SSN6.瘦肉面团中酵母麦芽糖代谢及发酵力的缺失

摘要

背景

葡萄糖镇压是面包师酵母的全球监管系统。面包师酵母菌株中的麦芽糖代谢受葡萄糖的负面影响,从而影响代谢物生产力(瘦面团中的脑内能力)。即使是由一般镇压系统构成的MIG1tup1.SSN6.已有相关研究报道,这三个基因在麦芽糖代谢中的作用尚不清楚。在这项工作中,我们探讨了MIG1和/或tup1.和/或SSN6.删除缓解葡萄糖抑制促进麦芽糖代谢和发酵能力的面包酵母。

结果

结果强烈提示删除MIG1和/或tup1.和/或SSN6.对麦芽糖代谢的葡萄糖抑制有不同的作用。删除tup1.阴性表示葡萄糖抑制促进麦芽糖代谢。相比之下,删除MIG1和/或SSN6.,而不是其他双基因或三重基因突变可以部分缓解葡萄糖抑制,从而促进麦芽糖代谢和酵母在瘦肉面团的发酵剂的能力。

结论

通过基因工程开发了工业贝克酵母的突变体,具有增强的麦芽糖代谢和瘦面团的生裂能力。这些面包师的酵母菌株具有出色的潜在工业应用。

背景

面包师的酵母(酿酒酵母酿酒酵母)是烘焙工业中使用的关键微生物。虽然在不添加糖的瘦肉面团中存在少量游离糖,但麦芽糖是面团发酵过程中可发酵碳的主要来源[[endnoteref: 3]]。1]- [3.]]。一个好的面包师酵母应该迅速发酵麦芽糖。然而,葡萄糖和果糖是在发酵过程中使用的第一糖,并且葡萄糖的存在或吸收对其他碳源的代谢产生负面影响[[4.]- [7.]]。鉴于参与麦芽糖使用的基因被葡萄糖抑制,通过有效减轻葡萄糖抑制来改善麦芽糖代谢和Baker酵母的疯狂代谢和生裂能力的合理方法。

Mig1,半胱氨酸2他的2锌手指蛋白质与几种基因的启动子结合,并在向培养基中加入葡萄糖时抑制其转录[[8.]- [10.]]。胡等人。已经表明,MIG1P压制了所有三个的转录MAL通过结合上游基因来对麦芽糖新陈代谢至关重要的基因[[11.]]。此外,Mig1通过招募通用辅抑制因子复合物Ssn6-Tup1来抑制转录[[12.]]。SSN6-Tup1是要识别的第一副压制配合物之一。与其他共压缩机一样,抑制的特异性由序列特异性DNA结合抑制剂确定,其募集SSN6-Tup1至靶基因启动子;这些阻遏物包括mig1 [[13.]- [16.]]。因此,在强烈的相关性之间MIG1tup1.SSN6.观察葡萄糖抑制。以往的研究表明,酵母的麦芽糖代谢可以部分抑制葡萄糖MIG1单基因突变通过增强转录MAL基因[[17.]- [19.]]。然而,通过沉默来缓解葡萄糖抑制对面包酵母麦芽糖代谢的影响tup1.和/或SSN6.还不清楚。此外,通过组合突变进行面包师酵母的麦芽糖代谢MIG1tup1.SSN6.目前还不清楚是何种物质打破了葡萄糖抑制的调节途径。

在本研究中,我们通过删除来破坏葡萄糖抑制的调节通路MIG1和/或tup1.和/或SSN6.研究…的影响MIG1tup1.SSN6.面包酵母麦芽糖代谢及发酵力之研究。结果表明,删除了MIG1和/或tup1.和/或SSN6.基因导致测试条件的结果不同。删除MIG1和/或SSN6.tup1.的删除和其他组合删除MIG1tup1.SSN6.瘦肉面团中葡萄糖对麦芽糖代谢的抑制作用及面包酵母的发酵力研究。这一发现为工业面包酵母菌株的优化奠定了基础。

结果

低糖模型液体面团(LSMLD)培养基中单基因缺失菌株的糖消耗

单基因突变的影响MIG1tup1.SSN6.在三个LSMLD媒体中测定糖消耗。这tup1.当葡萄糖在葡萄糖-麦芽糖LSMLD培养基中耗尽时,单基因缺失菌株B-TUP1不能快速利用麦芽糖,且不如亲本菌株BY14-α17(图)1C)。与父母应变相比BY14-α17相比,MIG1单基因缺失菌株B-MIG1在葡萄糖和麦芽糖LSMLD培养基中没有明显变化(图1但与亲本菌株相比,麦芽糖利用效率提高了10.8%(亲本菌株为21.3%,亲本菌株B- mig1为23.6%)。P.< 0.05),在葡萄糖-麦芽糖LSMLD培养基中,当葡萄糖耗尽时(图1C).同时,与亲本菌株相比,从消耗一半葡萄糖到消耗一半麦芽糖的时间跨度减少了10.2%(表1)。糖的利用效率明显提高SSN6.单基因缺失菌株B-SSN6与亲本菌株BY14-α17比较。B-SSN6对麦芽糖的利用效率分别比亲本提高18.3%和19.7%(亲本提高79.6%,亲本提高94.2%)。P.< 0.05)和葡萄糖-麦芽糖(亲本菌株21.3%,菌株B-SSN6 25.5%,P.< 0.05)分别为LSMLD介质(图1此外,与亲本品系BY14-α17相比,B- ssn6的表达时间跨度从2.15 h缩短至1.76 h(表31)。

图1
图1

LSMLD培养基中父母菌株中残留糖的浓度和单基因突变体。接种新鲜酵母细胞(一种)葡萄糖LSMLD介质,(b)麦芽糖LSMLD培养基和(C)葡萄糖 - 麦芽糖LSMLD培养基,并以合适的间隔进行采样。数据为三个独立实验的平均值,误差条代表±SD。

表格1亲本品系和转化子的时间跨度

这些结果表明,三个基因的单基因缺失(MIG1tup1.SSN6.)对面包酵母利用麦芽糖过程中葡萄糖抑制的缓解有不同的作用。单基因缺失的SSN6.MIG1促进葡萄糖解毒。特别是,单基因缺失SSN6.比较有效MIG1单基因删除。然而,tup1.单基因缺失是阴性的,以缓解葡萄糖抑制,以促进麦芽糖代谢。

LSMLD介质中双基因缺失菌株的糖消耗

对麦芽糖代谢的双基因突变体进行检测MIG1tup1.SSN6.在LSMLD介质中。尽管菌株B-MIG1-TUP1和B-TUP1-SSN6在三种LSMLD培养基中通过BY14-α17降低了葡萄糖和麦芽糖(图2), B-TUP1-SSN6的时间跨度仍比亲本株高6.98%(表1)。相比之下,B-MIG1-SSN6的时间跨度减少(10.7%),得到了积极的影响(表1)。当酵母细胞接种在麦芽糖和葡萄糖 - 麦芽糖Lsmld培养基中时,菌株B-MIG1-SSN6表现出比其他菌株的基本更快速的糖摄取。与父母菌株的蛋白质菌株相比,麦芽糖利用效率(患有菌株B-MIG1-SSN6中的21.3%和29.7%,P.< 0.05),当葡萄糖在葡萄糖-麦芽糖LSMLD培养基中耗尽时,菌株B-MIG1-SSN6明显增加了39.4%(图2C)。

图2.
figure2

LSMLD培养基中父母株中残留糖的浓度和双基因突变体。接种新鲜酵母细胞(一种)葡萄糖LSMLD介质,(b)麦芽糖LSMLD培养基和(C)葡萄糖 - 麦芽糖Lsmld培养基,并以合适的间隔进行采样。数据为三个独立实验的平均值,误差条代表±SD。

这些结果表明,三种基因的双基因缺失(MIG1tup1.SSN6.)也通过减轻葡萄糖抑制而对面包酵母的麦芽糖代谢产生不同的影响。的co-gene-deletionMIG1SSN6.缓解葡萄糖抑制,比MIG1-tup1.tup1.-SSN6.双基因缺失对麦芽糖代谢无明显作用。

三基因缺失菌株在LSMLD培养基中的糖消耗

利用B-MIG1-TUP1-SSN6进一步研究麦芽糖代谢MIG1tup1.SSN6.。令人惊讶的是,在B-MIG1-TUP1-SSN6中,与亲本菌株BY14-α17相比,麦芽糖摄取显著延迟,直到麦芽糖LSMLD培养基中的过程终止(图)3.B).与亲本菌株相比,菌株B- mig1 - tup1 - ssn6的麦芽糖利用效率为21.3%,菌株B- mig1 - tup1 - ssn6为16.9%,P.< 0.05),菌株B-MIG1-TUP1-SSN6在葡萄糖-麦芽糖LSMLD培养基中下降了20.7%(图3.C).在整个过程中,麦芽糖的消耗慢于BY14-α17。时间跨度明显增加(从2.15 h增加到2.32 h)1)。

图3.
图3

亲本菌株和三基因突变体在LSMLD培养基中的残糖浓度。接种新鲜酵母细胞(一种)葡萄糖LSMLD介质,(b)麦芽糖LSMLD培养基和(C)葡萄糖 - 麦芽糖Lsmld培养基,并以合适的间隔进行采样。数据为三个独立实验的平均值,误差条代表±SD。

这些结果表明了MIG1tup1.SSN6.三基因缺失无法缓解葡萄糖抑制和增强面包酵母的麦芽糖代谢MIG1tup1.SSN6.可以用作影响葡萄糖可抑制基因的复合物[[12.]]。

生长和发酵特性

考虑到获得的8个菌株糖消耗的多样性,我们进一步研究了不同碳源下的生长特性(特定生长率和生物量产量),并探索了瘦面团的膨松能力。单基因缺失和双基因缺失菌株的具体生长率和生物量产量见表2比较稳定(差异小,无统计学意义),说明单基因和双基因缺失MIG1tup1.SSN6.不影响菌株的生长。而三基因缺失的B-MIG1-TUP1-SSN6的特定生长率(0.14 h-1)低于亲本品系BY14-α17 (0.19 h-1)置于麦芽糖LSMLD培养基中。与亲本菌株相比,在葡萄糖-麦芽糖LSMLD培养基中,B-MIG1-TUP1-SSN6的生物量从5.9 g/L下降到5.1 g/L(表12)。阳性突变体B-MIG1,B-SSN6和B-MIG1-SSN6对凸起能力进行良好。与父母菌株达到14-α17相比,进化的CO2B-MIG1, B-SSN6和B-MIG1- ssn6在70分钟内从825 mL增加到875 mL (P.< 0.05), 900 mL (P.< 0.01)和925 mL (P.< 0.01)(图4.),而另一个菌株(B-Tup1,B-MIG1-Tup1,B-Tup1-SSN6和B-MIG1-Tup1-SSN6)显示了较低的CO2生产(数据未显示)。与亲本菌株相比,B-MIG1、B-SSN6和B-MIG1- ssn6的发酵时间明显缩短。

表2亲本品系及其转化子的生长特性
图4.
装具

CO.2亲本菌株和阳性突变体在瘦面团中的生产。我们将280克面粉,150毫升水,4克盐和8克新鲜酵母混合到发酵罐中,直到稳定的气体形成。数据为三个独立实验的平均值,误差条代表±SD。

这些发酵结果与LSMLD培养基中的糖消耗直接对应,这表明MIG1和/或tup1.和/或SSN6.对面包酵母在瘦肉面团中的发酵力产生了不同的影响。特别是,MIG1和/或SSN6.基因缺失可以改善发酵过程,且生理特性稳定。

讨论

葡萄糖对其他糖类的代谢和对面包酵母菌株的发酵特性有显著的下调作用。葡萄糖不会以类似的方式抑制所有的葡萄糖抑制基因[[20.]]。大量报道表明,Mig1阻滞剂和Ssn6-Tup1共阻滞剂是参与调节葡萄糖抑制机制的中心成分MAL表达 [[12.]、[21.]、[22.]]。此外,MIG1缺失并不减轻麦芽糖利用的葡萄糖抑制[[11.]、[23.]]。可能是遗传背景酿酒酵母使用的菌株导致了细胞对麦芽糖消耗的差异。tup1.SSN6.突变体产生各种表型,包括大量葡萄糖抑制基因的组成性抑制、钙依赖絮凝、MATα细胞的交合型缺陷和纯合子二倍体的无孢子形成[[]24.]、[25.]]。然而,不同的组合发生了突变MIG1tup1.SSN6.从未被认为能改善麦芽糖代谢。在本研究中,缺失突变MIG1和/或tup1.和/或SSN6.建立了用于工业面包师的酵母细胞,明确表明删除MIG1和/或tup1.和/或SSN6.对面包酵母的麦芽糖代谢和发酵力有不同的影响。

与亲本菌株相比,麦芽糖代谢的葡萄糖抑制部分地减轻了MIG1B-MIG1菌株中的单基因缺失(图1b to c),支持那些中断的点MIG1通过分泌的代谢物分泌葡萄糖抑制的部分减轻[[11.]、[22.]]。令人惊讶的是,共抑制因子Ssn6-Tup1的两个成员之间观察到明显的差异,SSN6.tup1.。糖的消耗趋势表明麦芽糖在tup1.单基因缺失菌株B-TUP1比亲本菌株BY14-α17更长,表明葡萄糖抑制负性减轻。相比之下,葡萄糖抑制部分缓解SSN6.单基因缺失菌株B-SSN6,增加麦芽糖代谢(图1Tup1和Ssn6参与葡萄糖控制的不同功能域可能是导致这两个基因缺失对葡萄糖抑制作用不同的主要原因。Ssn6的功能域主要由一个TPR基序的10个串联副本组成,对于抑制葡萄糖调节基因是特别必要的[[26.]]。Tup1的不同结构域可导致不同靶基因的抑制。例如,Tup1的一些WD基序或n端结构域对葡萄糖调控的基因的抑制不是必需的[[26.]- [29.]]。然而,Tup1的某些区域可能对葡萄糖抑制基因的高水平表达是必要的,例如加尔半乳糖发酵基因[[30.]]。因此,我们建议Tup1的区域对表达至关重要MAL基因通过完全基因缺失破坏。所以,MIG1单基因删除和SSN6.单基因缺失被认为是改善工业面包酵母中麦芽糖代谢的有效方法。

综合效应MIG1SSN6.tup1.对工业面包酵母中的麦芽糖代谢进行了进一步研究。结合突变的tup1.MIG1或者SSN6.补偿菌株B-Tup1的缓慢麦芽糖代谢,而突变体B-MIG1-Tup1和B-Tup1-SSN6中的麦芽糖消耗的速率仅接近父母菌株14-α17的速率(图2)。tup1.单基因缺失是可能限于葡萄糖抑制的减轻的负面影响。因此,MIG1或者SSN6.删除tup1.不能增强麦芽糖新陈代谢。与亲本菌株相比,双基因突变株B-MIG1-SSN6较少葡萄糖压抑(图2C).这一发现与之前的研究相一致,表明Ssn6与dna结合阻阻器的相互作用主要是通过Ssn6的不同表面介导的,Ssn6与Mig1特异性地相互作用[[31.]、[32.]]。B-MIG1-SSN6的葡萄糖抑制缓解不足可能是Mig1和Ssn6共同作用的结果。虽然Mig1对于将Ssn6绑定到MAL在上游,它对于ssn6介导的葡萄糖抑制反应很重要。令人惊讶的是,三基因突变体B-MIG1-TUP1-SSN6比亲本菌株更受葡萄糖抑制(图)3.)。考虑到Ssn6-Tup1复合物的相互作用包含多种机制,其他机制影响MAL基因表达也可能参与了MIG1-Tup1-SSN6复合物的抑制的调节[[13.]、[33.]]。此外,与亲本品系相比,B-MIG1-TUP1-SSN6的生理特性较弱,可能是导致其糖摄取较差的原因(表5)2)。

单基因和双基因缺失在三个LSMLD媒体中的特定生长速率和生物质产量并未出现任何明显的变化(表2)。换句话说,单基因的生长特性和双基因缺失MIG1和/或tup1.和/或SSN6.无显著差异(无统计学意义)均不足以影响麦芽糖代谢。因此,麦芽糖代谢(麦芽糖利用和CO2生产)与贝克酵母在本研究中的生理效果的霉菌差异不具有强烈相关性。

有效缓解葡萄糖抑制或快速由葡萄糖代谢向麦芽糖代谢转变是提高面包酵母在瘦肉面团中的发酵力的关键。的单基因MIG1/SSN6.和co-gene-deletionsMIG1SSN6.在稳定的生长性质中降低葡萄糖 - 麦芽糖LSMLD培养基中的跨度时间(表12)。因此,这些缺失会导致有效的发酵能力(图4.)。此外,在B-MIG1-SSN6中观察到脑内能力水平的明显增加,表明MIG1和SSN6共同起作用抑制麦芽糖利基。因此,共同基因缺失MIG1SSN6.能显著提高面包酵母的发酵力。这些优点与工业面包酵母菌株对发酵能力的要求是一致的。以最小的变换,SSN6.或者MIG1单基因缺失是获得麦芽糖代谢快速的面包酵母菌株的必要条件。

结论

本研究结果表明,参与麦芽糖代谢的葡萄糖抑制可以通过不同的基因突变进行不同水平的调节MIG1和/或tup1.和/或SSN6.。删除tup1.是消极的,缓解葡萄糖抑制,以促进麦芽糖代谢。相比之下,删除MIG1和/或SSN6.有效地缓解葡萄糖抑制,从而促进麦芽糖代谢和面包酵母在瘦肉面团中的发酵力。因此,这种面包酵母具有良好的商业和工业应用。

材料和方法

菌株和载体

表格3.总结本研究中使用的所有菌株和质粒的遗传性质。

表3本研究中使用的菌株和质粒的特征

生长,培养和发酵条件

重组DNA在大肠杆菌DH5α在37℃、添加100 μg/mL氨苄青霉素的Luria-Bertani培养基(10 g/L tryptone, 5 g/L酵母抽提物,10 g/L NaCl)中生长。质粒使用质粒Mini Kit II (D6945, Omega, USA)获得。

在30℃下保持酵母菌株在酵母提取物右旋糖(YEPD)培养基(YEPD)培养基(10g / L酵母提取物,20g / L蛋白胨和20g / l葡萄糖)中。在下一代富集糖蜜培养基中,通过离心(4℃,1500×G,5分钟)收获细胞,并在后续发酵实验中在4℃下用无菌水洗涤两次。为了探讨不同浓度的细胞外麦芽糖下的三种镇压因子之间的镇压程度,我们使用低糖模型液体面团发酵培养基[LSMLD发酵培养基,2.5克/ L(NH4.2所以4.,尿素5 g/L, KH 16 g/L26.,5 g / l na2HPO.4.,0.6 g / l mgso4.、烟酸0.0225 g/L、泛酸钙0.005 g/L、硫胺素0.0025 g/L、吡酮素0.00125 g/L、核黄素0.001 g/L、叶酸0.0005 g/L],含三种指定的碳源之一(40 g/L葡萄糖、38 g/L麦芽糖和33.25 g/L麦芽糖与5 g/L葡萄糖混合)。

为了筛选出耐Zeocin的酵母菌株,在YEPD培养皿中加入500 mg/L Zeocin(美国麦迪逊Promega公司)进行酵母培养。然后,采用YEPG培养基(酵母抽提液10 g/L,蛋白胨20 g/L,半乳糖20 g/L)克瑞斯在酵母转化子中的表达。

质粒和酵母转化子的构建

使用酵母DNA试剂盒(D3370-01, Omega, USA)从工业烘焙酵母菌株BY14-α17中制备酵母基因组DNA。本工作所用的PCR引物列于表中4.

表4本研究使用的引物(限制性酶切位点为斜体)

上游同源片段tup1.以BY14-α17基因组DNA为模板,TA-U和TA-D引物,采用PCR方法扩增基因。采用TB-U和TB-D引物扩增下游同源片段。PCR产物经相应的内切酶酶切后克隆到pUC19克隆载体上EcoR我和Kpn我的网站,萨尔我和Sph分别构建质粒puc-a的网站T.B.T.。这KanMX克隆用Pug6通过Pug6扩增的盒子,其用Pug6作为模板扩增,以构建PUC-AT.B.T.用合适的内切酶酶切生成最终质粒,命名为puckaT.B.T.。基于上述策略,PUC-KAS.B.S.插入上游同源片段构建质粒SSN6.一种,KanMX盒式磁带和下游同源片段SSN6.b进入puc19克隆载体。

贝克酵母转化是通过醋酸锂/PEG法实现的[[36.]]。删除磁带tup1.一种-loxP-KanMX-loxP-tup1.B通过14-α17被扩增并转化到工业面包师酵母中。将片段整合到染色体中tup1.通过同源重组,构建了BY14-α17基因座tup1.删除应变。的选择tup1.使用补充有800mg / L G418的YEPD培养基进行缺失菌株。选择后,用表中列出的引物验证重组菌株4.。表达Cre重组酶KanMX将质粒pSH-Zeocin导入tup1.导致B-TUP1缺失。采用相同的程序构建B-MIG1和B-SSN6。基于上述策略,将第二缺失盒转化为单基因突变株,构建双基因突变株B-MIG1-TUP1、B-MIG1-SSN6和B-TUP1-SSN6。通过转化构建了三基因突变株B-MIG1-TUP1-SSN6SSN6.一种-loxP-KanMX-loxP-SSN6.b进入b-mig1-tup1。最后,通过PCR通过PCR与表中列出的引物验证所有转化体4.

特定生长率和生物量产量的测定

孵育24小时后,将细胞培养物和培养基的混合物以适当的比例在特定的孔板中混合,使用生物屏幕自动生长曲线(芬兰生物屏C C型)检测生长曲线。测定比较速度与细胞浓度的比率测定的具体生长速率。

孔径尺寸为0.45mm(Gelman Sciences,Ann Arbor,Mi,USA)的硝酸纤维素过滤器在150W的微波炉中预先干燥10分钟,随后称重。从10mL细胞培养物中获得收获的细胞,用等粒蒸馏水洗涤两次,并在105℃下干燥24小时。从生物质干重的斜率与指数增长期间消耗的糖量的斜率确定生物质产率。实验至少进行了三次。

致敏能力的测定

通过测定CO含量来测定酵母细胞的发酵力2瘦面团生产。瘦面团由280克面粉,150毫升水,4克盐和8g新鲜酵母组成。面团在30±0.2°C下均匀并迅速混合5分钟,并置于发酵仪(JM451,瑞典JM451型)内部。CO.2生产记录在30°C。实验至少进行了三次。

食糖消耗量分析

对于细胞外糖测量,以30℃以合适的间隔对培养物进行培养物4小时。通过3,5-二硝基吡啶酸法(DNS)测量麦芽糖含量。HPLC具有折射率检测器和氨X-HPX-87H柱(Bio-rad,Hercules,CA,USA),在65°C,5毫米H.2所以4.流速为0.6 mL/min [[37.]]分析通过0.45μm孔径纤维素醋酸纤维素过滤器过滤的混合糖(MIL-LIPORE CORP,DANVERS,MA,USA)。麦芽糖LSMLD培养基中的麦芽糖利用效率取决于240分钟和总麦芽糖的消耗麦芽糖的比率确定。葡萄糖 - 麦芽糖LSMLD培养基中的麦芽糖利用效率由消耗的麦芽糖的比例确定,当葡萄糖耗尽时,并且总麦芽糖。基于葡萄糖LSMLD介质中葡萄糖和麦芽糖的消耗曲线,确定了一半葡萄糖和麦芽糖的葡萄糖之间的时间跨度。实验至少进行了三次。

统计分析

数据以均数±SD表示,并与独立进行的实验数一起表示。转化株与亲本品系的差异得到了证实T.-测试。差异P <0.05为统计学差异显著。

参考文献

  1. 1。

    couseau FE, Alves SL, Trichez D, Stambuk BU: maltotriose转运体的特性Saccharomyces Zubayanus.杂交的亚群酿酒酵母酵母菌啤酒酿造酵母菌株Weihenstephan 34/70。Lett苹果microbiol。2013,56:21-29。10.1111 / LAM.12011。

    中科院文章谷歌学术搜索

  2. 2。

    rincónam,codónac,castrejónf,本尼斯特·托:贝克酵母突变体的抗性抗毒性突变体的特性 -D.葡萄糖。环境微生物学杂志,2001,27(4):439 - 442。10.1128 / aem.67.9.4279 - 4285.2001。

    文章谷歌学术搜索

  3. 3.

    姜天祥,肖德广,高强:滞后和非滞后面包酵母菌株在瘦肉面团中麦芽糖代谢的特性。中华微生物学杂志。2008,37(6):649 - 652。10.1007 / BF03175571。

    中科院文章谷歌学术搜索

  4. 4.

    Horák J:糖转运体的调节:来自酵母的见解。中国生物医学工程学报。2013,59:1-31。10.1007 / s00294 - 013 - 0388 - 8。

    文章谷歌学术搜索

  5. 5。

    Reg1-Glc7蛋白磷酸酶与Snf1蛋白激酶的相互作用。中国生物医学工程学报,2000,20:1321-1328。10.1128 / mcb.20.4.1321 - 1328.2000。

    中科院文章谷歌学术搜索

  6. 6。

    Klein CJ,Olsson L,Nielsen J:葡萄糖控制酿酒酵母酿酒酵母: Mig1在代谢功能中的作用。微生物学。1998,144:13-24。10.1099 / 00221287-144-1-13。

    中科院文章谷歌学术搜索

  7. 7.

    Verstrepen KJ, Iserentant D, Malcorps P, Derdelinckx G, Van Dijck P, Winderickx J, Pretorius IS, Thevelein JM, Delvaux FR:葡萄糖和蔗糖:工业酵母的危险快餐?生物技术学报,2004,22:531-537。10.1016 / j.tibtech.2004.08.001。

    中科院文章谷歌学术搜索

  8. 8.

    Cao H,Yue M,Li S,Bai X,Zhao X,Du Y:影响MIG1和/或MIG2琥珀酸脱氢酶阴性的需氧代谢中断酿酒酵母酿酒酵母。苹果microbiol biotechnol。2011,89:733-738。10.1007 / s00253-010-2894-7。

    中科院文章谷歌学术搜索

  9. 9.

    Mig1葡萄糖阻阻器的核易位调控。中国生物医学工程学报,1997,8:1603-1618。10.1091 / mbc.8.8.1603。

    中科院文章谷歌学术搜索

  10. 10。

    孙晓,张超,董杰,吴敏,张勇,肖丹:过表达酵母对发酵性能的增强马尔62.删除的MIG1在瘦面团。J Ind Microbiol Biotechnol。2012,39:1533-1539。10.1007 / s10295-012-1144-7。

    文章谷歌学术搜索

  11. 11.

    关键词:麦芽糖,葡萄糖,抑制,麦芽糖代谢MIG1中断酿酒酵母酿酒酵母。环境微生物学杂志,1996,6:441- 449。

    中科院谷歌学术搜索

  12. 12.

    Triegel MA,Carlson M:SSN6-Tup1的抑制由MIG1,阻遏物/活化剂蛋白引导。Proc Natl Acad SCI U S A. 1995,92:3132-3136。10.1073 / pnas.92.8.3132。

    中科院文章谷歌学术搜索

  13. 13。

    Davie JK,Tumbly RJ,Dent Sy:Tup1-SSN6的组蛋白依赖关系,体内压抑基因。Mol细胞Biol。2002,22:693-703。10.1128 / mcb.22.3.693-703.2002。

    中科院文章谷歌学术搜索

  14. 14。

    Keleher Ca,Redd MJ,Schultz J,Carlson M,Johnson AD:SSN6-Tup1是酵母中的一般转录。细胞。1992,68:709-719。10.1016 / 0092-8674(92)90146-4。

    中科院文章谷歌学术搜索

  15. 15.

    Hanlon SE, Rizzo JM, Tatomer DC, Lieb JD, Buck MJ:胁迫反应因子Yap6, Cin5, Phd1,和Skn7直接靶向酿酒酵母保守的共抑制因子Tup1-Ssn6。公共科学图书馆,2011,6:e19060。

    中科院文章谷歌学术搜索

  16. 16。

    García-sánchezs,Mangan al,Russell Cl,Argimon S,Dennison P,Enjalbert B,Brown AJ:SSN6在真菌病原体中TuP1和NRG1依赖性基因调节的全局角色,念珠菌白葡萄酒。mol Biol细胞。2005,16:2913-2925。10.1091 / mbc.e05-01-0071。

    文章谷歌学术搜索

  17. 17.

    Hu Z, Nehlin JO, Ronne H, Michels CA:MIG1端依赖和MIG1- 依赖性葡萄糖调节MAL基因表达酿酒酵母酿酒酵母。《科学》,1995,28:258-266。10.1007 / BF00309785。

    中科院文章谷歌学术搜索

  18. 18.

    Klein CJL,Olsson L,Ronnow B,Mikkelsen JD,Nielsen J:葡萄糖和麦芽糖新陈代谢MIG1中断和MAL本构的酿酒酵母酿酒酵母。食品Technol Biotechnol。1997,35:287-292。

    中科院谷歌学术搜索

  19. 19.

    Schüller HJ:酵母非发酵代谢的转录控制酿酒酵母酿酒酵母。[j] .中国生物医学工程学报,2003,43:139-160。

    谷歌学术搜索

  20. 20。

    关键词:酵母,葡萄糖,传感,信号转导酵母菌研究2002,2:183-201。10.1111 / j.1567-1364.2002.tb00084.x。

    中科院文章谷歌学术搜索

  21. 21。

    Geladé R, Van de Velde S, Van Dijck P, Thevelein JM:酵母基因组对葡萄糖的多水平反应。基因组医学杂志2003,4:233。

    文章谷歌学术搜索

  22. 22。

    代谢工程在改善乳酸菌中所起的作用酿酒酵母酿酒酵母:利用工业媒体。微生物技术,2000,26:785-792。10.1016 / s0141 - 0229(00) 00172 - 1。

    中科院文章谷歌学术搜索

  23. 23。

    Klein CJ,Rasmussen JJ,RønnowB,奥尔森L,Nielsen J:对影响的影响MIG1MIG2论生理学酿酒酵母酿酒酵母。生物技术学报,1999,22(1):1 - 6。10.1016 / s0168 - 1656(98) 00205 - 3。

    中科院文章谷歌学术搜索

  24. 24。

    CYC8和TUP1蛋白参与葡萄糖抑制酿酒酵母酿酒酵母与蛋白质复合物相关联。Mol细胞Biol。1991,11:3307-3316。

    中科院文章谷歌学术搜索

  25. 25。

    varanasi US,Klis M,Mikesell PB,Trumbly RJ:CYC8(SSN6)-Tup1内容复合体由一个CYC8和四个Tup1亚基组成。Mol细胞Biol。1996,16:6707-6714。

    中科院文章谷歌学术搜索

  26. 26。

    符号PM,ZITOMER RS:酵母Tup1一般阻遏物的突变分析。遗传学。1998,148:637-644。

    中科院谷歌学术搜索

  27. 27。

    Tzamarias D, Struhl K: Cyc8独特的TPR基序参与招募Cyc8- tup1辅抑制因子复合物到差异调控启动子。基因工程学报,1995,9:821-831。10.1101 / gad.9.7.821。

    中科院文章谷歌学术搜索

  28. 28。

    张卓,Varanasi U, Trumbly RJ:酵母中全球阻遏因子Tup1的功能解剖:c -末端抑制域的主导作用。遗传学报,2002,37(6):649 - 654。

    中科院谷歌学术搜索

  29. 29.

    Lamas-Maceiras M, Freire-Picos MA, Torres AM:转录抑制kluyveromyces乳酸tup1 in.酿酒酵母酿酒酵母。微生物学与生物技术。2011,38:79-84。10.1007 / s10295 - 010 - 0832 - 4。

    文章谷歌学术搜索

  30. 30.

    Lee Ks,Hong Me,Jung Sc,Ha Sj,Yu Bj,Koo HM,Park Sm,Seo JH,Kweon DH,Park JC,Jin Ys:改进的半乳糖发酵酿酒酵母酿酒酵母通过逆代谢工程。生物工程学报。2011,108:621-631。10.1002 / bit.22988。

    中科院文章谷歌学术搜索

  31. 31.

    黄kh,struhl k:Cyc8-tup1复合物主要通过掩蔽募集蛋白的活化结构域来抑制转录。基因开发。2011,25:2525-2539。10.1101 / gad.179275.111。

    中科院文章谷歌学术搜索

  32. 32。

    Papamichos-Chronakis M, Gligoris T, Tzamarias D: Snf1激酶通过调节Mig1抑制因子和Cyc8-Tup1共抑制因子之间的相互作用来控制酵母中的葡萄糖抑制。EMBO代表2004,5:368 -372。10.1038 / sj.embor.7400120。

    文章谷歌学术搜索

  33. 33。

    葡萄糖抑制的协同释放mig1SSN.突变酿酒酵母酿酒酵母。中国生物医学工程学报,1999,15(1):49-54。

    中科院谷歌学术搜索

  34. 34。

    Gueldener U,Heinisch J,Koehler GJ,Voss D,Hegemann JH:第二组loxP磁带的标志克瑞斯- 在萌芽酵母中呈现多种基因敲除。核酸Res2002年,30:e23。

    中科院文章谷歌学术搜索

  35. 35。

    鲁俊,东俊,吴德,陈y,郭x,石y,太阳x,肖d:用较低的二乙酰生产和蛋白酶的重组工业酿造酵母施工。EUR FOITE RECONGOL。2012,235:951-961。10.1007 / S00217-012-1821-9。

    中科院文章谷歌学术搜索

  36. 36。

    Gietz Rd,Woods Ra:醋酸锂/单链载体DNA /聚乙二醇法转化酵母。方法酶。2002,350:87-96。10.1016 / s0076-6879(02)50957-5。

    中科院文章谷歌学术搜索

  37. 37。

    Hauf J,Zimmermann Fk,Müllers:酵母中七糖酵解酶的同时基因组过度表达酿酒酵母酿酒酵母。酶microb Technol。2000,26:688-698。10.1016 / s0141-0229(00)00160-5。

    中科院文章谷歌学术搜索

下载参考

致谢

目前的研究是中国国家自然科学基金(2013A102106),中国国家自然科学基金(31171730; 31000043),以及大学的长江学者和创新研究团队(IRT1166)的课程支持。

作者信息

隶属关系

相应的作者

对应到Cui-Ying张或者Dong-Guang肖

额外的信息

利益争夺

作者们宣称他们没有相互竞争的利益。

作者的贡献

XL进行了实验并起草了稿件。XWB和HYS参与了质粒和应变结构。Cyz和DGX构思了该研究并审查了最终手稿。所有作者阅读并认可的终稿。

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引用这篇文章

林,X.,张,CY。,白,XW。et al。的影响MIG1tup1.SSN6.瘦肉面团中酵母麦芽糖代谢及发酵力的缺失。MicroB细胞事实13,93(2014)。https://doi.org/10.1186/s12934-014-0093-4

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关键字

  • 面包酵母
  • 葡萄糖镇压
  • MIG1
  • tup1.
  • SSN6.
  • 麦芽糖代谢